HPLC系统标准操作规程(SOP)

1. 目的：规范高效液相色谱仪的使用。规范色谱柱的使用。
2．范围
适用于高效液相色谱仪的维护使用。
3．职责
仪器使用者对本规程的实施负责。
4．规程
4.1 系统组成：
本系统由LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站、色谱柱和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。
4.2 准备
4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）。
4.2.3 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3 开机：
接通电源，依次开启不间断电源、泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。
4.4 参数设定
4.4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。
4.4.2 流速设定：在泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
4.5 更换流动相并排气泡
4.5.1 将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
4.5.2 逆时针转动A/B泵的排液阀90-180°，打开排液阀；

4.6 平衡系统
4.6.1打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。
4.6.2. 按泵的[pump]键， pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统。
4.6.3 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
4.6.4 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过0.5MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5重复操作。
4.6.5 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
4.7 进样
4.7.1 进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
4.7.2 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
4.8．色谱柱的使用
4.8.1 色谱柱选择：根据拟定的质量标准选择C8、C18、SIL等类型，一般首选短柱（可节约时间及试剂），遇到不能分离情况可考虑长柱。
4.8.2 色谱柱使用：对色谱柱说明仔细阅读；使用相同类型预柱；应保证流动相PH在色谱柱适应范围内（ph 2-8）；保证柱压在可接受范围内（小于18MKP）。
4.8.3色谱柱清洗：
反相柱（C8、C18）
流动相含盐（可将加酸、加三乙胺等情况并入），以乙腈－水（5：95）冲洗30倍柱体积以上（可视具体情况增加冲洗量）。然后以甲醇冲洗20倍柱体积以上。
流动相不含盐 以流动相冲洗20倍柱体积以上，然后以甲醇冲洗20倍柱体积以上。
流动相为添加离子试剂：以乙腈－水（5：95）冲洗50倍柱体积以上（可视具体情况增加冲洗量）。然后以甲醇冲洗30倍柱体积以上。使用离子试剂色谱柱一般为专用，不建议用作其他项目测定。
正相柱
流动相含盐 以不含盐流动相冲洗30倍柱体积以上，再以正己烷冲洗20倍柱体积以上。如流动相极性与正己烷有较大差异，可在流动相冲洗后，以异丙醇低速冲洗进行过渡（注意以异丙醇为流动相流速不得超过0.5ml/min）。
流动相不含盐 以流动相冲洗20倍柱体积以上，再以正己烷冲洗20倍柱体积以上。如流动相极性与正己烷有较大差异，可在流动相冲洗后，以异丙醇低速冲洗进行过渡（注意以异丙醇为流动相流速不得超过0.5ml/min）。
4.8.4色谱柱保养
色谱柱不使用时，务必将两端密封。
对色谱柱不得有剧烈的震动或敲打等行为。
对于长期未使用的色谱柱，定期对其封存溶剂进行置换。