PDS—1000\He型基因枪操作流程

PDS—1000\He 型基因枪操作流程
微弹的制备：
1、EP管称取60 mg (或3mg)金粉；
2、加入1ml (或50ul)无水乙醇，振荡1min,10000rpm离心10S；
3、弃上清，加入1ml(或50ul) 无菌水洗，振荡1min,10000rpm离心10S；
4、弃上清，加入1ml(或50ul) 无菌水洗，振荡1min, -20℃；
DNA的包裹
1、50ul金粉悬液于EP管；
2、依次加入5ul/3ul质粒DNA（1ug/ul）,50ul 2.5M CaCl2 和20ul 0.1M亚精胺（每加完一样可振荡3S），静置10min； 
3、振荡3S，冰上10min，10000rpm离心10S，弃上清；
4、80ul无水乙醇，震荡重悬，10000rpm离心10S，弃上清；
5、10ul无水乙醇定容（重悬）；
6、每次用10ul点于微粒载膜中央，使其平铺，晾至完全干燥，待用；
基因枪的操作
1、打开真空泵和基因枪的电源开关；
2、打开氦气瓶阀门，旋转氦气调节杆，使气压高于所选可裂膜压力200psi左右；
3、旋下可裂膜挡盖，将可裂膜放在挡盖中央，将挡盖旋上，用专用板水平加固；
4、把微粒发射装置移出轰击室，旋下盖子，放入阻挡网，把微粒载片安装在固定槽中（有微粒的一面朝下），旋上盖子，将发射装置放回轰击室；
5、将样品盘放置在轰击室的适当位置，关上轰击室门；
6、按VAC开关(上档)抽真空，当表上读数为所需值时,开关打到HOLD（下档），然后按住FIER开关，当达到适当压力可裂膜自动破裂，松开FIER开关；
7、开关打到VENT（中间档），以释放轰击室内的真空；
8、打开轰击室门，取出样品盘；
9、取出微粒发射装置，卸下微粒载膜和阻挡网（阻挡网和微粒载膜放入70%的酒精浸泡）；
10、旋下可裂膜挡盖，清除可裂膜碎片；
11、若PDS—1000\He 型基因枪不再使用，关掉氦气瓶的主阀，按住FIER开关，按住FIE开关，放掉气体加速管内的氦气压力，最后关掉一切电源；