色谱柱的维护清洗方法

色谱柱的维护清洗方法
 
尺寸排阻色谱柱的清洗方法
 
分子尺寸排阻色谱柱吸附的主要原因
 
用于高分子分子量测定的分子尺寸排阻(SEC)色谱柱有SuperAW系列、α系列、PW·PWXL系列等产品。柱中填充介质与样品间常会发生：
 
(1)离子性吸附:分子尺寸排阻色谱柱中的树脂填充介质，由于羧基带有负电荷(尽管非常少)，样品中带有正电荷的组分将会与其发生离子吸附作用。
 
(2)疏水性吸附:分子尺寸排阻色谱柱中的树脂填充介质，会与一些疏水性较高的样品(如：具苯环物质)发生疏水吸附作用。
 
硅胶基质的填料，常会与一些难溶性膜蛋白等疏水性物质发生疏水性吸附作用。另外，残存的硅醇基会与碱性物质间发生离子吸附。对于硅胶基质的填料，虽然不是发生吸附作用，但必须考虑酸性条件下官能团会发生脱落或碱性条件下硅胶基质会发生溶解的情况。
 
分子尺寸排阻色谱柱的清洗方法
 
☆树脂基质分子尺寸排阻色谱柱的清洗方法
 
1、离子性吸附:对于阳离子性吸附物质，通过提高盐浓度进行过柱清洗。(1mol/L的醋酸缓冲液)
 
2、疏水性吸附:对于疏水性吸附物质，可通过提高有机溶剂的浓度(PW·PWXL：50%、α及SuperAW：100%可)进行过柱清洗。
 
3、复合吸附:对于阳离子性·疏水性物质的去除，可提高盐浓度进行过柱，水洗后，提高有机溶剂浓度进行过柱。
 
☆硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱的清洗方法
 
1、碱性物质的去除(离子性吸附)；通过提高淋洗液的盐浓度(通常0.5mol/L)进行过柱清洗。
 
2、疏水性吸附的去除(疏水性吸附)；在淋洗液中添加甲醇、乙腈(10-20%)等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。本法请注意缓冲液中盐的析出。
 
3、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂；在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性剂(Triton、Tween、Brij等)后进行过柱清洗。但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。
 
一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。在附吸成分其吸附力极强时，即使进行过清洗，柱性能也有可能得不到恢复。另外，请充分考虑淋洗液的pH值，以避免损坏色谱柱。
 
反相硅胶色谱柱的清洗方法
反相硅胶色谱柱吸附的主要原因
 
反相硅胶柱填充介质(固定相)与样品间常常会发生下列吸附现象：
 
(1)残存硅醇基与碱性物质间的离子吸附；
(2)硅胶表面的金属杂质与金属配位物质间的吸附；
(3)疏水性极强的物质在柱中的蓄积。以上现象，会引起反相色谱柱柱效下降、拖尾、重复性不良等状况的发生
 
反相硅胶色谱柱的清洗方法
 
反相硅胶色谱柱的清洗方法——疏水性物质的去除:
 
使用有机溶剂(乙腈、甲醇、乙腈与THF的混合溶剂)进行清洗。
 
考虑样品成分对于有机溶剂的溶解性，选用比淋洗液浓度高的有机溶剂、或选用极性较低的有机溶剂进行过柱清洗。这种情况下，有必要注意淋洗液中盐的析出现象。
 
反相硅胶色谱柱的清洗方法——碱性物质(金属配位物质)的去除:
 
使用酸性水溶液与有机溶剂的混合液(0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液)进行过柱清洗。
 
*一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。在附吸成分其吸附力极强时，即使进行过清洗，柱性能也有可能得不到恢复。另外，请充分考虑淋洗液的pH值，以避免损坏色谱柱。