摘要
HPLC法测定脂溶性维生素分析方法:样品中的维生素A 及维生素E 经皂化处理后,将其不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素A 和维生素E 分离,经紫外检测器检测,并用内标法定量测定。
内容
HPLC法测定脂溶性维生素分析方法
高效液相色谱分析
1.色谱条件(推荐条件)
预柱:hypersil ODS 5μm,4mm×10cm;
分析柱:hypersil ODS 5μm,4.6mm×25cm ;
流动相:甲醇:水=98:2;混匀,于临用前脱气;
紫外硷测器波长:300nm;量程0.02;
进样量:20μL 进样定量环;
流速: 1.65~1.70mL/min
2.样品分析
取样品浓缩液20μL,待绘制出色谱图及色谱参数后,再进行定性和定量。
定性:用标准物色谱峰的保留时间定性。
定量:根据色谱图求出某种维生素峰面积与内标物峰面积的比值,以此值在标准曲线上查到其含量。或用回归方程求出其含量。
3,计算
X=C/m×V×100/1000
X—某种维生素的含量(mg/100g);
C—由标准曲线上查到某种维生素含量(μg/mL);
V—样品浓缩定容体积(mL);
m:样品质量(g)。
用微处理机二点内标法进行计算时.按其计算公式计算或由微机直接给出结果。结果的允许测定结果相对偏差绝对值≤10%
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