吸光光度法

一：吸光光度法基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法。（一） 光线：光线的波长： 200nm-400nm 紫外线*400-750nm可见光*>750nm 红外线光具有波粒二相性，波长不同，其能量不同。（二） 物质的吸收光谱及颜色：1． 物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原
一：吸光光度法
基于物质对不同波长的光波具有选择性吸收的能力而建立起来的分析方法。
（一） 光线：
光线的波长： 200nm-400nm 紫外线*
400-750nm可见光*
>750nm 红外线
光具有波粒二相性，波长不同，其能量不同。
（二） 物质的吸收光谱及颜色：
1． 物质的原子吸收光谱和原子发射光谱：原子的最外层电子可以选择性吸收特征波长的电磁波成为
激发态而产生的光谱称为原子吸收光谱。激发态原子恢复到基态，则释放出特征波长的光子，形成原子发射光谱。不同的溶液其光谱不同，即不同溶液对不同波长的光其吸收能力不同，对某一特定波长的光存在吸收峰。
2． 可见光由赤橙黄绿青兰紫等能量不同的光线组成，当可见光穿过某一溶液时，由于特定波长的
光被吸收而使溶液呈现相应的颜色。（如CuSO4由于吸收了可见光中的黄光(600nm)而成蓝色）不同颜色的溶液对不同波长的光其吸收能力不同。
（三） 光吸收的基本定律（Lambert-Beer 定律）：
一束平行单色光（Io）通过有色的透明溶液时，一部分的光可以透过溶液（It），另一部分被溶液吸收（Ia）,还有一部分被器皿表面反射（Ir）,则：
Io=It+Ia+Ir 。那么，该溶液透光率为: T = It / Io 。
1． Lambert 定律：设有一束平行单色光,通过液层厚度为b 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k2b
k2 为吸光系数，为常数。与入射光波长、溶液性质、浓度和温度有关；A 为吸光度（又称光密度
O.D 或消光度E），当入射光波长、吸光溶液的浓度和温度一定时，A 与b 成正比。
2． Beer 定律：设有一束平行单色光,通过浓度为c 的均匀透明溶液,则溶液对光的吸收能力:
A=Ig(Io/It)=Ig(1/T)=k4c
k2 为常数。由Beer 定律可知：当入射光波长、吸光溶液的厚度和温度一定时，A 与c 成正比。
3． Lambert-Beer 定律：综合1.2.得： A=Kbc ,
即：当入射光波长、吸光溶液的性质和温度一定时，A 与b、c 成正比。
（四） 吸光光度法的基本原理：
1、 不同物质，由于其分子结构和原子组成不同，故对光的吸收光谱不同（如：CuSO4），在测定不同颜
色的物质浓度时要用最大吸收的波长的入射光，这样测量的灵敏度最高。
2、 同一种物质，若浓度不同，则对同一波长的入射光的吸收能力（吸光度）也不同，且成正比关系。
3、 应此，利用特定波长的单色光（通常用最大吸收波长的入射光）照射不同浓度的某一溶液时，所得的吸光度大小应与溶液浓度呈线性关系，故可利用该线性关系通过计算或查标准曲线来求得未知溶液的浓度。
（五） 吸光光度法特点：
1． 灵敏度高：mg%级、甚至ug%级。
2． 准确度高：误差2-5%
3． 操作简便、快速，仪器设备不复杂，价格低廉，故应用广泛。