【检查】 碱度 取本品，加水制成每1ml中含0.1g的溶液，振摇使溶解，室温放置10分钟后，依法测定（附录Ⅵ H），pH值应为8.0～10.0。
有关物质 取本品适量，精密称定，用流动相A溶解并定量稀释成每1ml中约含3mg的溶液，作为供试品溶液；另取氨苄西林对照品适量，精密称定，用流动相A溶解并定量稀释成每1ml中约含30μg的溶液，作为对照溶液。照氨苄西林项下的方法测定；。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，氨苄西林二聚物峰面积不得大于对照溶液主峰面积的4.5倍（4.5%），其它单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%），其它各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5倍（5.0%）（供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计）。
可见异物 取本品5份，每份各2g，加微粒检查用水制成每1ml中含0.1g的溶液，依法检查（附录IX H），应符合规定。
不溶性微粒 取本品3份，加微粒检查用水制成每1ml中含50mg的溶液，依法检查（附录IX C），每1g样品中，含10μm以上的微粒不得过6000粒，含25μm以上的微粒不得过600粒。
无菌 取规定量全部溶解于500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中（样品溶液浓度：0.04g/ml），用薄膜过滤法处理后，以0.1%蛋白胨水溶液为冲洗液，每膜用量不少于400ml，分次冲洗后，在最后一次冲洗液中加入2ml青霉素酶，以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检查（附录XI H），应符合规定。（酶单位）
[增订]
【性状】 比旋度 取本品,精密称定,用0.4%邻苯二甲酸氢钾溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含2.5mg的溶液,依法测定（附录Ⅵ E）,比旋度为+258°至+287°。
【鉴别】 [2]（1）取本品加水制成每1ml中约含10mg的溶液，加碱性酒石酸铜试液3滴，即显紫色。
（2）取本品加水制成每1ml中约含10mg的溶液，加盐酸羟胺试液1ml，振摇，加酸性硫酸铁铵试液1滴，摇匀，即显深红色。
（3）取本品和氨苄西林对照品适量，分别用磷酸盐缓冲液（取无水磷酸氢二钠0.50g与磷酸二氢钾0.301g，加水溶解使成1000ml，pH值为7.0）溶解并稀释制成每1ml中各含1mg的溶液；作为供试品溶液与对照品溶液，取上述两种溶液等量混合，作为混合溶液。照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-水-甲苯-冰醋酸（65︰10︰10︰2.5）为展开剂，展开，晾干，喷以0.3%茚三酮乙醇显色液，于90℃加热至出现斑点。混合溶液所显主斑点应为单一斑点，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液或混合溶液主斑点的颜色与位置相同。
残留溶剂 取本品约0.3g，精密称定，置顶空瓶中，精密加水3ml使溶解，密封瓶口，作为供试品溶液；分别精密称取丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、二氯甲烷、甲基异丁基酮、甲苯和正丁醇各适量，加水定量稀释制成每1ml中分别含丙酮0.5mg、乙酸乙酯0.5mg、异丙醇0.5mg、二氯甲烷0.2mg、甲基异丁基酮0.5mg、甲苯89μg和正丁醇0.5mg的混合溶液，精密量取3ml，置顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P）试验，采用硝基对苯二酸改性的聚乙二醇为固定液（或极性相似的固定液）的毛细管色谱柱，程序升温，初始温度60℃维持6分钟，以每分钟20℃的升温速率升至150℃，维持8分钟；检测器为氢火焰离子化检测器（FID），检测器温度为250℃；进样口温度为150℃；载气为氮气。顶空进样，顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，进样体积为1.0ml。取对照品溶液顶空进样，记录色谱图，按丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、二氯甲烷、甲基异丁基酮、甲苯和正丁醇顺序出峰，各主峰之间的分离度均应符合要求。再分别精密量取供试品溶液与对照品溶液顶空进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含二氯甲烷不得过0.2%，含丙酮、乙酸乙酯、异丙醇、甲基异丁基酮、甲苯和正丁醇均应符合规定。
2-乙基己酸 取本品，照2-乙基己酸测定法（附录 ）测定，含2-乙基己酸不得过0.8%。
重金属 取本品1.0g，依法检查（附录Ⅷ H第二法），含重金属不得过百万分之二十。
细菌内毒素 取本品，依法检查（附录XI E），每1mg氨苄西林中含内毒素的量应小于0.1EU。