氧化苦参碱是从豆科槐属植物苦豆子(Sophora alopecuroides L.)及苦参(Sophora flavescens Ait.)根中提取分离得到的一种双稠哌啶衍生物。现代药理学研究表明氧化苦参碱具有抗心率失常、抗炎、抗肿瘤等作用^［1，2］。据文献报道氧化苦参碱血药浓度的测定方法有离子对比色法^［3］、毛细管气相色谱法^［4］等，本文用高效液相色谱法测定了人血浆中的氧化苦参碱含量，此方法具有专属性强、血浆用量少、检测灵敏度高、测定稳定性好、快捷方便等特点。
1　仪器与试药
LC－10A高效液相色谱仪，SPD－10A紫外检测器，C－R7Ae色谱数据处理器(日本岛津)；FZQ－2型旋涡混合器；LN－9527－01型高速离心机(美国雅培公司)。
氧化苦参碱对照品：批号为0780－9703(中国药品生物制品检定所提供，丙酮重结晶后使用)。甲醇、己烷为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
氧化苦参碱对照品储备液：精密称取氧化苦参碱适量，用水溶解制成浓度为200 mg^.L^-1的溶液，置4 ℃冰箱内保存备用。
受试者：4名，年龄22～25岁，体重76～90 kg，均为健康男性。
2　色谱条件
Spherisorb－SiO₂不锈钢柱(250 mm×4.6 mm)5 μm；流动相：甲醇一正己烷(4∶1)，每100 mL加28 %氨水1.2 mL。流速：2.0 mL^.min^-1；检测波长：220 nm。
3　血浆样品处理
精密吸取血浆样品0.5 mL，置10 mL离心管中，加入0.8 mol^.L^-1高氯酸1.0 mL，混旋振荡1 min，离心5 min(3000 r^.min^-1)，将上清液全部转移至10 mL离心管中，加入20 %氢氧化钠溶液0.35 mL，用氯仿－正丁醇混合液(98∶2) 3 mL混旋振荡提取2次，每次2 min，离心3 min(3000 r^.min^-1)，合并有机相，在70 ℃水浴中氮气吹干，将残留物准确用200 μL甲醇溶解，离心3 min(10000 r^.min^-1)，取20 μL进样分析，血浆色谱图见图1。
4　标准曲线制备
精密吸取健康人空白血浆0.5 mL，共7份，置7支10 mL离心管中，定量加入氧化苦参碱对照品储备液，使其浓度分别为1.2、2.4、4.8、7.2、12.0、24.0、36.0 mg^.L^-1，按“样品处理方法”项下操作，进行色谱分析，以氧化苦参碱峰面积A对浓度C(mg^.L^-1)进行线性回归，得回归方程：
A=12912.65C-5426.69　r=0.9999　n=3
当S/N=2时，最低检出浓度为0.1 mg^.L^-1。

A.      空白血浆　B.氧化苦参碱血浆样品
1.氧化苦参碱(11.2 min)

 

5   回收率试验
分别于0.5 mL空白血浆中定量加入氧化苦参碱对照品储备液，使其浓度分别为1.2、4.8、12.0、36.0 mg^.L^-1，按“样品处理方法”项下操作，由标准曲线计算求得的血药浓度与实际浓度之比即为本方法的回收率。结果见表1。

6　精密度试验
分别在“回收率试验”项下4种血药浓度水平上进行日内与日间(5 d)精密度考察。

7　稳定性试验
　　取正常人空白血浆5 mL，定量加入氧化苦参碱对照品储备液，使其浓度为4.8 mg^.L^-1，分为三组，每组三管，每管0.5 mL。第一组立即处理并测定；第二组立即处理后残渣置-20 ℃冰箱1周后测定；第三组血浆样品置-20 ℃冰箱1周后处理并测定。结果表明，第二、第三组相对第一组的含量分别为98.8 %和102.5 %，表明氧化苦参碱稳定性良好。
8　样品测定
4位健康志愿者肌肉注射氧化苦参碱注射液300 mg，给药后的5、10、20、30、40、60、90、120 min定时静脉取血2 mL。分离血浆，取0.5 mL按“血浆样品处理”项下操作，测定氧化苦参碱含量，以给药时间为横坐标，血浆中的氧化苦参碱浓度的对数为纵坐标绘制药时曲线

9　讨论
本文曾采用C₁₈柱及氨基键合柱作为分离柱，以甲醇、水、乙腈等作为流动相，试图对氧化苦参碱血浆样品进行分离，但均未取得成功，最终以硅胶柱为分离柱，甲醇—己烷(4∶1)为流动相，获得了理想的分离及峰形。流动相中适当加入氨水可以很好地改善氧化苦参碱的峰形。　　氧化苦参碱极性较大，很难被有机溶剂提取，在强碱性条件下以游离碱形式存在时在氯仿中具有较好的溶解性，因此我们采用了氯仿—正丁醇混合液提取法，结果十分理想。用高氯酸沉淀血清蛋白后，氢氧化钠溶液的加入量是影响氧化苦参碱提取率的关键因素，实际测定中，20 %氢氧化钠的加入量超过0.30 mL时氧化苦参碱的提取率较高。
有人曾用三氯醋酸作为血清样品提取前的蛋白沉淀剂^［5］。在本实验条件下采用它，血清峰较复杂，对氧化苦参碱的分离有干扰，所以我们用高氯酸作为蛋白沉淀剂，结果满意。